Filamin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400557-ACT

FLNA codifica a filamina A, um grande arcabouço ligante de actina que faz ligações cruzadas entre a F-actina e coordena a montagem de complexos de sinalização mecanossensíveis na membrana plasmática e ao longo do citoesqueleto. A filamina A integra sinais provenientes de integrinas, de GTPases da família Rho e de vias associadas a receptores para regular a forma celular, a migração, a dinâmica de adesão e o tráfego de membrana. Por meio de interações com canais, GPCRs e adaptadores de sinalização, influencia a remodelação do citoesqueleto e as respostas transcricionais ao estresse mecânico. A desregulação ou mutação de FLNA está associada a distúrbios do desenvolvimento e contribui para alterações na motilidade celular e na arquitetura tecidual, relevantes para fenótipos neurovasculares e de tecido conjuntivo.

Filamin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FLNA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Filamin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FLNA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FLNA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Filamin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FLNA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Filamin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Filamin 1 em células tumorais com expressão de FLNA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.