Plásmido CRISPR de Activación (h) Fibulin-5: sc-402597-ACT

FBLN5 codifica la fibulina-5, una glucoproteína de la matriz extracelular que se une a la elastina y a las integrinas para favorecer el ensamblaje de las fibras elásticas y la elasticidad tisular en la piel, el sistema vascular y el pulmón. La fibulina-5 ayuda a organizar la arquitectura microfibrilar y modula la adhesión célula–matriz, influyendo en procesos como el comportamiento de las células de músculo liso, la angiogénesis y la remodelación de la matriz a través de vías vinculadas a las interacciones entre la MEC y sus receptores y a la regulación de proteasas. Las alteraciones en la expresión o la función de FBLN5 se han asociado con una elastogénesis desregulada, fragilidad del tejido conectivo y cambios degenerativos en tejidos elásticos, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la homeostasis de la MEC. En sistemas modelo humanos, la perturbación de FBLN5 se utiliza para explorar cómo la composición de la matriz extracelular condiciona la señalización celular, la biomecánica y los fenotipos a nivel tisular.

Fibulin-5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FBLN5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fibulin-5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FBLN5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FBLN5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fibulin-5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FBLN5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fibulin-5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fibulin-5 en células tumorales con expresión de FBLN5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.