Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fibulin-1: sc-401754-ACT

FBLN1 code la fibuline‑1, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui s’associe aux fibres élastiques et aux composants de la membrane basale afin de réguler l’assemblage de la matrice, l’adhésion cellulaire et le remodelage tissulaire. La fibuline‑1 interagit avec les intégrines et d’autres protéines de la MEC pour influencer l’organisation du cytosquelette, la migration cellulaire et la disponibilité des facteurs de croissance, ce qui la relie aux voies de signalisation matrice extracellulaire–récepteur et à la mécanotransduction. Des altérations de l’expression de FBLN1 et du dépôt de fibuline‑1 ont été observées dans des contextes de remodelage vasculaire, de fibrose et de modifications stromales associées aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de phénotypes induits par le microenvironnement. Dans des modèles cellulaires humains, FBLN1 est fréquemment étudié pour ses contributions aux interactions épithélio‑mésenchymateuses, à la fonction endothéliale et à la régulation, dépendante de la matrice, de la prolifération et de la motilité.

Fibulin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FBLN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fibulin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FBLN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FBLN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fibulin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FBLN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fibulin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fibulin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FBLN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.