Fibronectin Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400082-LAC

FN1 codifica a fibronectina, uma glicoproteína da matriz extracelular de alto peso molecular que se organiza em redes fibrilares e medeia a adesão celular, a migração e a mecanotransdução por meio da interação com integrinas. A fibronectina coordena a organização da matriz extracelular, a dinâmica das adesões focais e a remodelação do citoesqueleto, influenciando vias como a sinalização integrina–FAK/SRC, a regulação de GTPases da família Rho e a remodelação da matriz associada a TGF-β. Como componente central do reparo de feridas e da homeostase tecidual, a fibronectina contribui para a transição epitélio-mesenquimal, programas angiogênicos e interações com o estroma. A expressão desregulada de FN1 e a deposição alterada da matriz de fibronectina estão implicadas em remodelação fibrótica, microambientes inflamatórios e no crosstalk tumor–estroma relevante para fenótipos associados à metástase.

As Partículas de Ativação Lentivirais Fibronectin (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de FN1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Fibronectin (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição FN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Fibronectin. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo FN1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.