Particules Lentivirales d'Activation (h) FHR-1: sc-416510-LAC

CFHR1 code le facteur du complément H–related protein 1 (FHR-1), un régulateur sécrété de la voie alterne du complément qui se lie à C3b/C3d et module l’activité de la C3 convertase à la surface des cellules hôtes et des micro-organismes. En modulant l’amplification du complément, FHR-1 influence l’opsonisation, la signalisation inflammatoire et l’élimination des complexes immuns, s’inscrivant à l’interface de la surveillance immunitaire innée et de l’homéostasie endothéliale. Des variations génétiques ou une expression altérée de CFHR1 ont été associées à une dérégulation de l’activité du complément pertinente pour des atteintes rénales et vasculaires, notamment le syndrome hémolytique et urémique atypique et la dégénérescence maculaire liée à l’âge, ainsi qu’à des formes d’auto-immunité médiées par le complément. La manipulation expérimentale de CFHR1 soutient des études mécanistiques de la régulation du complément, des réseaux de protéines sériques et du dépôt de composants du complément à la surface cellulaire en conditions inflammatoires.

Les particules d'activation lentivirales FHR-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CFHR1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FHR-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CFHR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FHR-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CFHR1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.