Plásmido CRISPR de Activación (h) FHOD1: sc-404286-ACT

FHOD1 (que contiene el dominio de homología 2 de formina 1) codifica una formina relacionada con Diaphanous que cataliza el ensamblaje lineal de filamentos de actina y coordina la comunicación cruzada entre actina y microtúbulos para controlar la forma celular, la adhesión y la migración direccional. La actividad de FHOD1 influye en vías de remodelación del citoesqueleto vinculadas a las GTPasas Rho y contribuye a la formación de fibras de estrés y de estructuras contráctiles de actomiosina. A través de su papel en la dinámica del citoesqueleto, FHOD1 se ha asociado con procesos relevantes para la remodelación tisular, el comportamiento celular invasivo y la motilidad desregulada observada en múltiples contextos de enfermedad, incluida la biología del cáncer. Por lo tanto, modular la expresión de FHOD1 resulta útil para desentrañar mecanismos de mecanotransducción, polarización celular y fenotipos dependientes de la migración en sistemas modelo humanos.

FHOD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FHOD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FHOD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FHOD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FHOD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FHOD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FHOD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FHOD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FHOD1 en células tumorales con expresión de FHOD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.