Plasmide Double Nickase (h) FHL-2: sc-402930-NIC

FHL2 code la protéine « four-and-a-half LIM domains protein 2 » (FHL-2), un adaptateur composé uniquement de domaines LIM, localisé aux adhésions focales et dans le noyau, où il coordonne des interactions protéine–protéine reliant la dynamique du cytosquelette au contrôle transcriptionnel. FHL-2 module la signalisation intégrines/FAK, le remodelage de l’actine dépendant des GTPases Rho et les programmes de mécanotransduction, et peut influencer les sorties transcriptionnelles via des interactions avec des facteurs tels que β-caténine/TCF et d’autres régulateurs spécifiques du contexte. Par ces rôles, FHL2 est lié à des processus cellulaires incluant l’adhésion, la migration, la prolifération et la différenciation. Une expression ou une activité dérégulée de FHL2 a été associée à des altérations du remodelage tissulaire et à des états de signalisation oncogéniques, soulignant sa pertinence pour l’étude de la fibrose, de la biologie cardiovasculaire et du comportement des cellules cancéreuses.

FHL-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FHL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FHL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FHL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FHL2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.