Particules Lentivirales d'Activation (h) FGFR-3: sc-400184-LAC

FGFR3 code le récepteur 3 des facteurs de croissance des fibroblastes (FGFR‑3), une tyrosine kinase réceptrice qui régule les décisions de destinée cellulaire en couplant des ligands FGF extracellulaires à des signalisations intracellulaires. Lorsqu’il est activé, FGFR‑3 recrute des protéines adaptatrices et déclenche en aval les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT, PLCγ et STAT, influençant la prolifération, la différenciation, la survie et l’homéostasie tissulaire. En biologie humaine, FGFR‑3 est un modulateur clé du développement squelettique et du comportement des cellules épithéliales, et sa dérégulation est impliquée dans des anomalies du contrôle de la croissance. Les altérations de l’activité de FGFR3 et de la sortie de signalisation qui en résulte sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que les troubles du développement et le remodelage des voies associé au cancer.

Les particules d'activation lentivirales FGFR-3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FGFR3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FGFR-3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FGFR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FGFR-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FGFR3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.