Plasmide CRISPR d'Activation (h) FGF-9: sc-403118-ACT

FGF9 code le facteur de croissance des fibroblastes 9 (FGF-9), un mitogène sécrété se liant à l’héparine, qui transmet ses signaux principalement via les récepteurs FGFR afin de réguler la prolifération cellulaire, la survie et la spécification des lignées au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. L’activité de FGF-9 s’intègre aux cascades des récepteurs à activité tyrosine kinase, notamment les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et PLCγ, et influence les interactions épithélio-mésenchymateuses, les réponses angiogéniques et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée de FGF9 ou une signalisation anormale de la voie FGFR a été associée à des programmes développementaux altérés et à des phénotypes oncogéniques dans de multiples contextes tissulaires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des réseaux de facteurs de croissance. En tant que ligand endogène au sein de l’axe FGF–FGFR au sens large, FGF-9 est fréquemment étudié pour ses effets sur les programmes transcriptionnels qui gouvernent la différenciation, la migration et la prolifération.

FGF-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FGF9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FGF-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FGF9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FGF9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FGF-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FGF9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FGF-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FGF-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de FGF9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.