Plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-19 (h): sc-401725
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- FGF-19 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique FGF-19, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FGF-19 Antibody (H-12): sc-390621
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-19 (h) | sc-401725 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
FGF19 code le facteur de croissance des fibroblastes 19 (FGF-19), un FGF endocrinien qui signale principalement via FGFR4 en association avec le corécepteur β-Klotho afin de réguler l’homéostasie métabolique. Dans les hépatocytes et les entérocytes, FGF-19 participe au contrôle rétroactif des acides biliaires en réprimant CYP7A1 et en s’intégrant à des programmes transcriptionnels pilotés par FXR, qui influencent le métabolisme des lipides et du glucose. La signalisation en aval mobilise MAPK/ERK et des cascades de kinases apparentées, reliant FGF-19 à la croissance cellulaire, à la différenciation et à l’adaptation métabolique spécifique des tissus. Une expression ou une signalisation de FGF19 dérégulée a été associée à des altérations du métabolisme des acides biliaires et à des phénotypes de maladies métaboliques, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de la signalisation de croissance aberrante en biologie du cancer.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-19 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FGF19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FGF19, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FGF19 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FGF-19.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FGF19 pour l'étude de la signalisation de FGF-19, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de FGF19 essentiels à la fonction de FGF-19
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FGF19 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le FGF-19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FGF-19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FGF19. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le FGF-19 plasmide HDR (h) et le FGF-19 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FGF19 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FGF19 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.