Plasmide CRISPR d'Activation (h) FGF-18: sc-402175-ACT

FGF18 code le facteur de croissance des fibroblastes 18 (FGF-18), un mitogène sécrété qui transmet principalement ses signaux via les récepteurs tyrosine kinases de la famille FGFR afin de réguler la prolifération cellulaire, la survie et la spécification des lignages. Dans les tissus humains, FGF-18 contribue aux programmes de développement et d’homéostasie, notamment la chondrogenèse et l’ostéogenèse, en modulant l’activité des voies MAPK/ERK et PI3K/AKT et en influençant le remodelage de la matrice extracellulaire. Les dynamiques de signalisation FGF/FGFR altérées sont fréquemment étudiées dans des contextes de dérégulation de la croissance, de remodelage tissulaire et de communications croisées au sein du microenvironnement tumoral. En tant que nœud de voie aux effets étendus sur la différenciation et la signalisation mitogène, FGF18 est couramment étudié dans des modèles de biologie squelettique, de signalisation stromale et de programmes transcriptionnels dépendants des facteurs de croissance.

FGF-18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FGF18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FGF-18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FGF18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FGF18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FGF-18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FGF18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FGF-18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FGF-18 dans les cellules tumorales présentant une expression de FGF18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.