Plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-17 (h): sc-405951

Présentation

FGF17 code le facteur de croissance des fibroblastes 17 (FGF-17), un ligand sécrété se liant à l’héparine qui transmet principalement ses signaux via les récepteurs tyrosine kinases de la famille FGFR afin de réguler la prolifération cellulaire, la survie et la spécification des lignages. L’activité de FGF-17 mobilise des cascades RTK canoniques, notamment RAS–MAPK/ERK et PI3K–AKT, influençant la mise en place des tissus et des programmes mitogènes dépendants du contexte. En biologie humaine, une dérégulation de la signalisation FGF/FGFR est fréquemment associée à des trajectoires de développement altérées et à l’activation de voies oncogéniques, faisant de FGF17 un nœud d’intérêt pour étudier la dynamique de la signalisation induite par les facteurs de croissance. L’étude de FGF17 soutient la recherche mécanistique sur la communication paracrine/autocrine, la disponibilité des ligands modulée par la matrice extracellulaire et les interactions entre voies de signalisation susceptibles de façonner des phénotypes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-17 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FGF17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FGF17, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FGF17 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FGF-17.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FGF17 pour l'étude de la signalisation de FGF-17, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FGF17 essentiels à la fonction de FGF-17
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FGF17 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FGF-17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FGF-17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FGF17. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FGF-17 plasmide HDR (h) et le FGF-17 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FGF17 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FGF17 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.