Plásmido Doble Nickase (h) fetuin-A: sc-401125-NIC

AHSG codifica la glicoproteína plasmática humana fetuina‑A, un factor secretado derivado de los hepatocitos que circula en alta abundancia y se une a complejos de calcio y fosfato para modular la homeostasis mineral extracelular. La fetuina‑A participa en la regulación de la calcificación al formar partículas calciproteicas e influir en la señalización osteogénica, y puede interactuar con múltiples ligandos para afectar vías inflamatorias y metabólicas. En sistemas celulares, la alteración de la expresión de AHSG o de la disponibilidad de fetuina‑A se ha asociado con cambios en la señalización de la insulina, la función de los adipocitos y los estados de activación de los macrófagos. La desregulación de la fetuina‑A se ha estudiado en contextos que incluyen la calcificación ectópica, fenotipos asociados al síndrome metabólico, la inflamación crónica y la patobiología relacionada con el riñón y el sistema vascular, lo que respalda su uso como marcador mecanístico en modelos de investigación traslacional.

fetuin-A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AHSG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AHSG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AHSG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AHSG alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.