fetuin-A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419056

Descripción general

Ahsg codifica la fetuina-A, una glicoproteína secretada de origen hepático que circula en el plasma y modula el metabolismo mineral al unirse al calcio y al fosfato, limitando la calcificación ectópica mediante la formación de partículas calciproteicas. La fetuina-A también influye en la señalización inflamatoria y en la homeostasis metabólica, incluidos efectos sobre vías asociadas al receptor de insulina y la activación de macrófagos, y a menudo se estudia en el contexto de respuestas sistémicas de fase aguda. En modelos murinos, se han vinculado niveles alterados de fetuina-A con calcificación patológica, disfunción metabólica y remodelado tisular, lo que convierte a Ahsg en un punto útil para desentrañar la comunicación cruzada entre la secreción hepática, la mineralización de la matriz extracelular y los procesos de la inmunidad innata. Su localización extracelular y su amplia capacidad de unión respaldan investigaciones sobre interacciones proteómicas, biología de factores séricos y microambientes propensos a la calcificación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO fetuin-A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ahsg en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ahsg junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ahsg tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína fetuin-A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ahsg para la investigación de la señalización de fetuin-A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ahsg críticos para la función de fetuin-A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ahsg para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido fetuin-A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido fetuin-A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ahsg. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR fetuin-A (m) y el plásmido HDR fetuin-A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ahsg para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ahsg definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.