Plasmide CRISPR/Cas9 KO fetuin-A (m): sc-419056

Présentation

Ahsg code la fœtuine‑A, une glycoprotéine sécrétée d’origine hépatique qui circule dans le plasma et module le métabolisme minéral en se liant au calcium et au phosphate, limitant la calcification ectopique via la formation de particules calciprotéiques. La fœtuine‑A influence également la signalisation inflammatoire et l’homéostasie métabolique, notamment en agissant sur des voies liées au récepteur de l’insuline et sur l’activation des macrophages, et elle est souvent étudiée dans le contexte des réponses systémiques de phase aiguë. Dans des modèles murins, des variations des niveaux de fœtuine‑A ont été associées à une calcification pathologique, à des dysfonctionnements métaboliques et au remodelage tissulaire, faisant d’Ahsg un nœud utile pour analyser les interactions entre la sécrétion hépatique, la minéralisation de la matrice extracellulaire et les processus de l’immunité innée. Sa localisation extracellulaire et sa large capacité de liaison soutiennent les études sur les interactions protéomiques, la biologie des facteurs sériques et les microenvironnements propices à la calcification.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO fetuin-A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ahsg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ahsg, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ahsg à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine fetuin-A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ahsg pour l'étude de la signalisation de fetuin-A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ahsg essentiels à la fonction de fetuin-A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ahsg pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le fetuin-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le fetuin-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ahsg. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le fetuin-A plasmide HDR (m) et le fetuin-A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ahsg pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ahsg définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.