fetuin-A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401125

Descripción general

AHSG codifica la fetuina-A, una glucoproteína secretada producida principalmente por los hepatocitos, que circula en el plasma y se asocia con complejos minerales y de lipoproteínas. La fetuina-A modula la homeostasis mineral extracelular al unirse al calcio y al fosfato, influyendo en la formación de partículas calciproteicas y controlando la calcificación ectópica; además, interactúa con la señalización de TGF-β/BMP para modelar programas de diferenciación osteogénica. Como proteína sérica multifuncional, la fetuina-A se estudia con frecuencia en el contexto de la inflamación metabólica, la regulación de la señalización de la insulina y las respuestas de los macrófagos, vinculando la biología de AHSG con fenotipos cardiometabólicos y relacionados con la calcificación. La expresión alterada de AHSG o los niveles de fetuina-A se han asociado con cambios en la función hepática y con procesos sistémicos relevantes para la calcificación aterosclerótica, el desequilibrio mineral en la enfermedad renal crónica y modelos de síndrome metabólico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO fetuin-A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AHSG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AHSG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AHSG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína fetuin-A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AHSG para la investigación de la señalización de fetuin-A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AHSG críticos para la función de fetuin-A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AHSG para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido fetuin-A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido fetuin-A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AHSG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR fetuin-A (h) y el plásmido HDR fetuin-A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AHSG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AHSG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.