Plasmide Double Nickase (m) Ferroportin-1: sc-424774-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Ferroportin-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ferroportin-1 Double Nickase (m) et le plasmide Ferroportin-1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc40a1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) Ferroportin-1 | sc-424774-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc40a1 code la ferroportine-1, principal exportateur cellulaire du fer, qui contrôle la distribution systémique et tissulaire du fer en médiant l’efflux de Fe²⁺ à partir des entérocytes, des macrophages, des hépatocytes et des cellules placentaires. L’activité de la ferroportine est étroitement régulée par l’axe hepcidine–ferroportine, dans lequel la liaison de l’hepcidine déclenche l’internalisation puis la dégradation de la ferroportine, reliant ainsi le flux de fer à des signaux inflammatoires et métaboliques. En modulant la disponibilité du fer, la ferroportine-1 influence l’érythropoïèse, la fonction mitochondriale, les réponses au stress oxydatif et le recyclage du fer par les macrophages. Une dérégulation de l’homéostasie du fer dépendante de Slc40a1 est pertinente dans les états de surcharge en fer comme dans ceux de restriction martiale, et est fréquemment modélisée dans des études portant sur l’anémie de l’inflammation, le métabolisme hépatique du fer, la biologie des infections et la neuroinflammation.
Ferroportin-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc40a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc40a1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc40a1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc40a1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.