Plasmide Double Nickase (h) ferritin heavy chain: sc-418152-NIC

FTH1 code la chaîne lourde de la ferritine humaine, une sous-unité à activité ferroxydase qui convertit le Fe²⁺ en Fe³⁺ afin de favoriser une séquestration sûre du fer au sein des coquilles de ferritine et de maintenir l’homéostasie du fer intracellulaire. En tamponnant le fer labile et en limitant la chimie de Fenton, FTH1 influence les réponses au stress oxydatif, la fonction mitochondriale et les programmes de mort cellulaire dépendants du fer tels que la ferroptose. L’expression de FTH1 est régulée par la signalisation élément de réponse au fer/protéine régulatrice du fer (IRE/IRP) et s’articule avec le renouvellement autophagique de la ferritine (ferritinophagie) via NCOA4 pour contrôler la mobilisation du fer. Une biologie de la ferritine dérégulée et des niveaux altérés de FTH1 sont fréquemment associés à l’inflammation, à la neurodégénérescence, à des états liés à l’anémie et au remodelage métabolique associé aux tumeurs, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la gestion du fer.

ferritin heavy chain Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FTH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FTH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FTH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FTH1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.