Plasmide CRISPR/Cas9 KO FEN-1 (h): sc-403168

Présentation

FEN1 code pour la flap endonucléase 1 (FEN-1), une nucléase spécifique de structure qui clive les intermédiaires de type « 5′ flap » lors de la maturation des fragments d’Okazaki et de la réparation par excision de base à long patch. FEN-1 agit de concert avec PCNA et les ADN polymérases pour assurer la fidélité de la réplication de l’ADN, le traitement des fourches de réplication bloquées et la résolution de structures secondaires de l’ADN susceptibles d’induire une instabilité génomique. Par ses rôles dans les réponses au stress réplicatif, le choix des voies de réparation et le maintien de l’intégrité chromosomique, une fonction altérée de FEN1 est associée à l’accumulation de mutations et à des signatures liées à la biologie des cancers et à la sensibilité aux dommages de l’ADN. FEN-1 est donc largement utilisée comme point d’entrée mécanistique pour étudier les réseaux de réparation de l’ADN, les processus couplés à la réplication et la signalisation des points de contrôle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FEN-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FEN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FEN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FEN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FEN-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FEN1 pour l'étude de la signalisation de FEN-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FEN1 essentiels à la fonction de FEN-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FEN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FEN-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FEN-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FEN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FEN-1 plasmide HDR (h) et le FEN-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FEN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FEN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.