Plasmide Double Nickase (h) FcRn: sc-400689-NIC

FCGRT code le récepteur Fc néonatal (FcRn), un hétérodimère apparenté aux molécules du CMH de classe I, qui se lie aux IgG et à l’albumine de manière dépendante du pH afin d’assurer leur sauvetage intracellulaire et une transcytose bidirectionnelle. FcRn fonctionne au sein des voies de trafic endosomal, en triant ses ligands à pH acide puis en les relarguant à la surface cellulaire, façonnant ainsi l’homéostasie des anticorps, la prise en charge des antigènes et l’immunité muqueuse. Dans les compartiments endothélial et épithélial, FcRn influence le transport médié par le fragment Fc et le recyclage des IgG, avec des répercussions sur des contextes de signalisation inflammatoire où la disponibilité des IgG et la dynamique des complexes immuns sont déterminantes. Des altérations de l’activité de FcRn/FCGRT ont été étudiées en lien avec l’auto-immunité et les mécanismes des maladies inflammatoires, via leurs effets sur la persistance des IgG et les réponses immunitaires dépendantes du Fc.

FcRn Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FCGRT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FCGRT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FCGRT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FCGRT.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.