Plasmide CRISPR d'Activation (h) FcRH5: sc-413461-ACT

FCRL5 (FcRH5) est un récepteur immunorégulateur restreint aux cellules B de la famille des récepteurs de type Fc, qui module les seuils de signalisation lors de l’activation et de la différenciation des cellules B. Via des motifs tyrosiniques cytoplasmiques de type immunorécepteur, FcRH5 influence des voies dépendantes de la phosphorylation liées à la signalisation du récepteur des cellules B, à la réponse aux cytokines et à l’homéostasie immunitaire. Son expression est enrichie dans l’ensemble des sous-populations de cellules B matures et elle est fréquemment évaluée comme marqueur des transitions d’état des cellules B au sein des tissus lymphoïdes secondaires. Une expression dérégulée de FCRL5 a été associée à une altération de la fonction des cellules B dans des contextes de stimulation immunitaire chronique et dans des cancers d’origine B, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la biologie des cellules B et de l’immunologie tumorale.

FcRH5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FCRL5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FcRH5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FCRL5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FCRL5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FcRH5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FCRL5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FcRH5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FcRH5 dans les cellules tumorales présentant une expression de FCRL5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.