Plasmide CRISPR/Cas9 KO FcRH1 (m): sc-432859

Présentation

Fcrl1 code pour le récepteur de type Fc receptor–like 1 (FcRH1), un récepteur immunorégulateur associé aux lymphocytes B, impliqué dans l’ajustement de la signalisation déclenchée par le récepteur de l’antigène et des programmes d’activation en aval. Dans les tissus lymphoïdes de la souris, l’expression de FcRH1 est liée aux états de différenciation des lymphocytes B et à la modulation d’événements de signalisation proximaux qui recoupent des voies contrôlant le flux de calcium, l’activité des MAPK et les réponses transcriptionnelles après l’engagement du BCR. En influençant les seuils d’activation et de survie des lymphocytes B, Fcrl1 constitue un point d’entrée fonctionnel pour étudier la dynamique des centres germinatifs, la tolérance immunitaire et les mécanismes qui façonnent les réponses en anticorps. Les réseaux de signalisation de type Fc receptor–like dérégulés sont fréquemment étudiés dans le contexte de phénotypes anormaux des lymphocytes B et de pathologies associées au système immunitaire, ce qui souligne l’intérêt de Fcrl1 pour la recherche en immunologie mécanistique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FcRH1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fcrl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fcrl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fcrl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FcRH1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fcrl1 pour l'étude de la signalisation de FcRH1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fcrl1 essentiels à la fonction de FcRH1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fcrl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FcRH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FcRH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fcrl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FcRH1 plasmide HDR (m) et le FcRH1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fcrl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fcrl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.