Plasmide Double Nickase (h) Fc ε RIγ: sc-417621-NIC

FCER1G code la sous-unité de signalisation FcεRIγ, un adaptateur porteur d’un motif ITAM qui s’associe à de multiples récepteurs immunitaires pour coupler la liaison du ligand à des cascades d’activation intracellulaires. Dans les cellules myéloïdes et les mastocytes, FcεRIγ participe à la signalisation des récepteurs Fc et des récepteurs lectines de type C, favorisant l’activation des kinases Src/Syk, les flux calciques en aval, la signalisation MAPK et des programmes transcriptionnels qui régulent la dégranulation, la production de cytokines et les réponses phagocytaires. Par ces voies, FcεRIγ contribue à façonner les fonctions effectrices innées et dépendantes des anticorps, et elle est fréquemment étudiée dans l’inflammation allergique, la biologie des infections et la dysrégulation immunitaire. Une expression altérée ou une signalisation via des complexes récepteurs associés à FcεRIγ a été liée à des phénotypes inflammatoires et constitue un point d’entrée mécanistique pour analyser les états d’activation des cellules immunitaires.

Fc ε RIγ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FCER1G dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FCER1G. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FCER1G. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FCER1G.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.