Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fc ε RIγ (m): sc-420303

Présentation

Fcer1g code pour la chaîne gamma du récepteur Fc (FcεRIγ), un adaptateur de signalisation contenant un motif ITAM, qui s’associe à de nombreux immunorécepteurs — notamment FcεRI et des complexes de récepteurs Fcγ — afin de relier la reconnaissance du ligand à l’activation en aval. Lors du pontage (crosslinking) des récepteurs, FcεRIγ déclenche des cascades de signalisation dépendantes de SYK, qui recoupent les voies PI3K, PLCγ et MAPK, ainsi que les flux calciques, la dégranulation, la production de cytokines et les programmes phagocytaires dans les cellules myéloïdes et les populations immunitaires résidentes des tissus. Chez la souris, Fcer1g soutient la détection innée et les réponses effectrices des macrophages, des cellules dendritiques, des mastocytes et de la microglie, en modulant le tonus inflammatoire et la gestion des complexes immuns. Les voies liées à FcεRIγ lorsqu’elles sont dérégulées sont largement étudiées dans l’inflammation allergique, les pathologies auto-immunes médiées par des complexes immuns et les processus neuro-inflammatoires, où la signalisation des récepteurs Fc influence les lésions tissulaires et le remodelage.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Fc ε RIγ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fcer1g dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fcer1g, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fcer1g à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Fc ε RIγ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fcer1g pour l'étude de la signalisation de Fc ε RIγ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fcer1g essentiels à la fonction de Fc ε RIγ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fcer1g pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Fc ε RIγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Fc ε RIγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fcer1g. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Fc ε RIγ plasmide HDR (m) et le Fc ε RIγ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fcer1g pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fcer1g définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.