Plasmide CRISPR/Cas9 KO FBXW2 (h): sc-406409

Présentation

FBXW2 code une protéine contenant un domaine F-box et des répétitions WD, qui agit comme composant de reconnaissance des substrats des complexes d’ubiquitine ligase E3 de type SCF (SKP1–CUL1–F-box), aidant à orienter des protéines spécifiques vers l’ubiquitination et la dégradation par le protéasome. En contrôlant de manière régulée le renouvellement de facteurs impliqués dans la signalisation et le cycle cellulaire, FBXW2 contribue à la protéostasie et à l’ajustement fin des voies qui régulent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Une régulation altérée médiée par l’ubiquitine est une caractéristique fréquente de la signalisation oncogénique et d’autres troubles impliquant une homéostasie protéique perturbée, ce qui fait de FBXW2 un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur le remodelage des voies. FBXW2 présente donc un intérêt pour étudier comment des programmes de dégradation ciblée influencent le phénotype cellulaire dans des contextes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FBXW2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FBXW2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FBXW2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FBXW2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FBXW2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FBXW2 pour l'étude de la signalisation de FBXW2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FBXW2 essentiels à la fonction de FBXW2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FBXW2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FBXW2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FBXW2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FBXW2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FBXW2 plasmide HDR (h) et le FBXW2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FBXW2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FBXW2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.