FBXW2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406409

Descripción general

FBXW2 codifica una proteína que contiene un motivo F-box y repeticiones WD, y que funciona como componente de reconocimiento de sustratos en los complejos de ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), ayudando a dirigir proteínas específicas para su ubiquitinación y degradación por el proteasoma. Mediante el recambio regulado de factores asociados a la señalización y al ciclo celular, FBXW2 contribuye a la proteostasis y al ajuste fino de las vías que controlan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La alteración de la regulación mediada por ubiquitina es una característica común de la señalización oncogénica y de otros trastornos que implican una homeostasis proteica alterada, lo que convierte a FBXW2 en un nodo relevante para estudios mecanísticos sobre el reconfigurado de vías. Por ello, FBXW2 es de interés para investigar cómo los programas de degradación dirigida influyen en el fenotipo celular en contextos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FBXW2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FBXW2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FBXW2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FBXW2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FBXW2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FBXW2 para la investigación de la señalización de FBXW2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FBXW2 críticos para la función de FBXW2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FBXW2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FBXW2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FBXW2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FBXW2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FBXW2 (h) y el plásmido HDR FBXW2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FBXW2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FBXW2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.