Particules Lentivirales d'Activation (m) FBXO3: sc-425412-LAC

Le gène murin *Fbxo3* code FBXO3, un récepteur de substrats à boîte F au sein des complexes d’ubiquitine‑ligase E3 SCF (SKP1–CUL1–F‑box), qui confèrent la spécificité du renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. Grâce à la dégradation régulée d’intermédiaires de signalisation, FBXO3 peut influencer la dynamique des voies inflammatoires et de l’immunité innée, les réponses au stress cellulaire et les voies de protéostasie. Une activité altérée des protéines à boîte F associées aux complexes SCF est fréquemment liée à une dérégulation de la signalisation des cytokines, à des points de contrôle aberrants du cycle cellulaire et du stress, ainsi qu’à des voies plus larges pertinentes pour les mécanismes des maladies inflammatoires. *Fbxo3* constitue donc un nœud utile pour disséquer, dans des modèles cellulaires murins, le contrôle de la transduction du signal et des programmes transcriptionnels par le système ubiquitine–protéasome.

Les particules d'activation lentivirales FBXO3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Fbxo3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FBXO3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Fbxo3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FBXO3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Fbxo3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.