FBXO3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425412

Übersicht

Fbxo3 kodiert in der Maus das F‑Box‑Protein FBXO3, eine Komponente der SCF‑(SKP1–CUL1–RBX1)-E3‑Ubiquitin‑Ligasekomplexe, die als Substraterkennungsfaktor dient und zur Kontrolle der Proteostase über ubiquitinabhängigen Proteinabbau beiträgt. Durch die Steuerung selektiver Ubiquitinierung beeinflusst FBXO3 die Dynamik der Zellsignalübertragung, Programme des Zellzyklus und der Stressantwort sowie die Stabilität von Signalweg‑Regulatoren. Veränderte Aktivität innerhalb von SCF‑/F‑Box‑Netzwerken wurde mit fehlregulierter Entzündung und umfassenderen Immun-Signalwegen sowie mit Veränderungen der zellulären Homöostase in Zusammenhang gebracht, die für die Krankheitsbiologie relevant sind. Diese Eigenschaften machen Fbxo3 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die Kontrolle von Signalübertragung und Phänotyp durch den Ubiquitin‑Proteasom‑Weg zu untersuchen.

Das FBXO3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fbxo3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fbxo3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fbxo3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FBXO3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fbxo3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FBXO3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fbxo3-Exone abzielen, die für die FBXO3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fbxo3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FBXO3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FBXO3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fbxo3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FBXO3 HDR-Plasmid (m) und FBXO3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fbxo3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fbxo3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.