Plásmido CRISPR de Activación (m) FBP1: sc-424568-ACT

El gen Fubp1 de ratón codifica la proteína 1 de unión a elementos aguas arriba distales (FBP1), un regulador que se une a ácidos nucleicos monocatenarios y que modula la transcripción y el metabolismo del ARNm al interactuar con elementos reguladores situados muy aguas arriba y coordinar la dinámica transcripcional. FBP1 influye en la progresión del ciclo celular, en programas génicos sensibles al estrés y en el control postranscripcional mediante interacciones con complejos asociados a promotores y con la maquinaria de procesamiento de ARN. La actividad desregulada de FUBP1/FBP1 se ha vinculado a cambios en la proliferación y en el control del estado de linaje, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios sobre regulación transcripcional oncogénica y estabilidad del genoma. En sistemas de modelos murinos, alterar la expresión de Fubp1 es relevante para dilucidar el reclutamiento de factores de transcripción, la regulación asociada a la cromatina y las vías que acoplan señales de crecimiento con la salida de expresión génica.

FBP1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fubp1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FBP1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fubp1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fubp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FBP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fubp1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FBP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FBP1 en células tumorales con expresión de Fubp1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.