Plasmide CRISPR d'Activation (m) FBP1: sc-424568-ACT

Le gène murin *Fubp1* code la protéine 1 se liant à l’élément très en amont (FBP1), un régulateur se fixant aux acides nucléiques simple brin qui module la transcription et le métabolisme des ARNm en interagissant avec des éléments régulateurs situés très en amont et en coordonnant la dynamique transcriptionnelle. FBP1 influence la progression du cycle cellulaire, les programmes géniques répondant au stress et le contrôle post-transcriptionnel via des interactions avec des complexes associés aux promoteurs et la machinerie de maturation des ARN. Une activité dérégulée de FUBP1/FBP1 a été associée à des altérations de la prolifération et du contrôle de l’état de lignée, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude de la régulation transcriptionnelle oncogénique et de la stabilité du génome. Dans des systèmes de modèles murins, la perturbation de l’expression de *Fubp1* est utile pour analyser le recrutement des facteurs de transcription, la régulation associée à la chromatine et les voies qui couplent les signaux de croissance à la production d’expression génique.

FBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fubp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fubp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fubp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fubp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Fubp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.