Plasmide CRISPR d'Activation (h) FBP1: sc-401293-ACT

Le gène humain **FUBP1** code la protéine 1 de liaison à l’élément très en amont (FBP1), un régulateur se liant aux acides nucléiques simple brin qui module les programmes transcriptionnels et post‑transcriptionnels en interagissant avec des éléments associés aux promoteurs et des cibles ARN. FBP1 est surtout connue pour son influence sur l’expression de **MYC** et sur des réseaux géniques plus larges qui gouvernent la progression du cycle cellulaire, la prolifération et les réponses adaptatives au stress. Par ces activités, FUBP1 est relié à des voies contrôlant la régulation transcriptionnelle associée à la chromatine et le métabolisme de l’ARN, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de l’expression génique dépendante du contexte. Une activité ou un dosage altérés de FUBP1 ont été rapportés dans plusieurs contextes liés au cancer et au neurodéveloppement, ce qui soutient son utilisation dans des modèles mécanistiques de signalisation oncogénique, de différenciation et de stabilité du génome.

FBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FUBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FUBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FUBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FUBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FUBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.