Plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL4 (m): sc-435345
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- FBL4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique FBL4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FBL4 Antibody (A-7): sc-376102
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL4 (m) | sc-435345 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Fbxl4 code une protéine à domaine F-box et à répétitions riches en leucine, qui agit comme composant de reconnaissance des substrats des complexes ligases E3 ubiquitine de type SCF (SKP1–CUL1–F-box), contribuant à orienter des protéines spécifiques vers une dégradation dépendante de l’ubiquitine. En régulant la protéostasie, FBXL4 peut influencer la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et, plus largement, la dynamique du système ubiquitine–protéasome. Chez la souris, une activité altérée de FBXL4 a été associée à l’homéostasie mitochondriale et au métabolisme énergétique cellulaire, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude des dysfonctionnements mitochondriaux et des phénotypes de maladies multisystémiques associés. Fbxl4 constitue donc une cible utile pour analyser comment le contrôle qualité médié par l’ubiquitine s’articule avec les voies métaboliques et le maintien des organites.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fbxl4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fbxl4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fbxl4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FBL4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fbxl4 pour l'étude de la signalisation de FBL4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Fbxl4 essentiels à la fonction de FBL4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fbxl4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le FBL4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FBL4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fbxl4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le FBL4 plasmide HDR (m) et le FBL4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fbxl4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fbxl4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.