Plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL4 (h): sc-407372

Présentation

FBXL4 code une protéine à domaine F-box et à répétitions riches en leucine (FBL4) qui agit comme composant de reconnaissance des substrats des complexes ligases E3 ubiquitine SCF (SKP1–CUL1–F-box), en aidant à coupler des protéines spécifiques à l’ubiquitination et à leur dégradation par le protéasome. Grâce à une dégradation protéique régulée, FBL4 contribue aux programmes de protéostasie cellulaire qui influencent l’homéostasie mitochondriale, le métabolisme énergétique et les réponses au stress. Des variants pathogènes de FBXL4 ont été associés à des phénotypes mitochondriaux encéphalomyopathiques sévères, caractérisés par une phosphorylation oxydative altérée et une intégrité du réseau mitochondrial perturbée. Ces caractéristiques font de FBXL4 une cible pertinente pour étudier comment les voies médiées par l’ubiquitine s’articulent avec la biogenèse mitochondriale et le contrôle qualité dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FBXL4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FBXL4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FBXL4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FBL4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FBXL4 pour l'étude de la signalisation de FBL4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FBXL4 essentiels à la fonction de FBL4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FBXL4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FBL4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FBL4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FBXL4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FBL4 plasmide HDR (h) et le FBL4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FBXL4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FBXL4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.