Plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL10 (h): sc-403232

Présentation

KDM2B code pour la protéine humaine FBL10, une déméthylase des lysines des histones à domaine JmjC, qui reconnaît l’ADN riche en CpG via son doigt de zinc CxxC et module l’accessibilité de la chromatine. FBL10 participe à la répression transcriptionnelle associée aux complexes Polycomb et contribue à coordonner des programmes épigénétiques contrôlant la progression du cycle cellulaire, l’engagement de lignée et le maintien de l’identité cellulaire. En régulant les états de méthylation des histones ainsi que l’activité des promoteurs et des enhancers, KDM2B influence des voies gouvernant la prolifération et la différenciation. Une activité de KDM2B dérégulée et un ciblage altéré de la chromatine ont été associés à des états transcriptionnels oncogéniques et à des phénotypes aberrants de type « cellule souche » dans divers contextes cancéreux et hématopoïétiques, ce qui en fait un locus utile pour des études mécanistiques du contrôle épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KDM2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KDM2B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KDM2B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FBL10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KDM2B pour l'étude de la signalisation de FBL10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KDM2B essentiels à la fonction de FBL10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KDM2B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FBL10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FBL10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KDM2B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FBL10 plasmide HDR (h) et le FBL10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KDM2B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KDM2B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.