Plasmide Double Nickase (h) Fatso: sc-403708-NIC

Le gène humain **FTO** (Fatso) code une déméthylase des acides nucléiques dépendante du Fe(II)/2‑oxoglutarate, qui élimine la **N6‑méthyladénosine (m6A)** et des modifications méthylées apparentées de l’ARN, modulant ainsi l’épissage, la stabilité et la traduction des ARNm. Par ce contrôle épitranscriptomique, FTO influence l’homéostasie énergétique cellulaire, l’adipogenèse et les programmes de détection des nutriments, avec des effets en aval sur des voies liées à la fonction mitochondriale et aux réponses au stress métabolique. Des variations génétiques ou une expression dérégulée de FTO ont été associées au risque d’obésité et à des phénotypes métaboliques plus larges, et une activité de FTO altérée est étudiée dans des contextes impliquant le contrôle de la croissance et la différenciation cellulaire. Ces propriétés font de FTO une cible largement utilisée pour explorer la régulation de l’expression génique dépendante de la méthylation de l’ARN dans les cellules humaines.

Fatso Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FTO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FTO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FTO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FTO.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.