Plasmide Double Nickase (m) FAT10: sc-423986-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) FAT10 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FAT10 Double Nickase (m) et le plasmide FAT10 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ubd. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) FAT10 | sc-423986-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ubd chez la souris code FAT10 (également appelé ubiquitine D), un modificateur de type ubiquitine rapidement induit par des signaux inflammatoires et impliqué dans le ciblage, dépendant de la FAT10ylation, de substrats vers le protéasome 26S. FAT10 intervient à l’interface de la régulation du système ubiquitine–protéasome, de la signalisation immunitaire et des réponses au stress cellulaire, influençant le renouvellement des protéines et la protéostasie. Dans des contextes immunitaires et épithéliaux, une expression altérée de FAT10 a été associée à des modifications du contrôle du cycle cellulaire, de la sensibilité à l’apoptose et de l’activité des voies inflammatoires. Ces caractéristiques font de Ubd/FAT10 un nœud moléculaire utile pour étudier le remodelage tissulaire associé à l’inflammation et la dérégulation de la protéostasie pertinente pour la maladie dans des modèles murins.
FAT10 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ubd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ubd. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ubd. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ubd.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.