Plasmide CRISPR d'Activation (m) FAT10: sc-423986-ACT

Le gène murin **Ubd** code **FAT10**, un modificateur de type ubiquitine qui est conjugué à des substrats protéiques via une cascade **E1/E2/E3** et les oriente vers la dégradation par le protéasome, selon un mode pouvant se distinguer de l’ubiquitination canonique. L’expression de **FAT10** est fortement induite par les cytokines inflammatoires et contribue à la signalisation immunitaire, au traitement des antigènes et à l’adaptation au stress cellulaire via la régulation de l’homéostasie protéique. En modulant la dégradation de protéines régulatrices clés, **FAT10** influence le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et les réponses immunitaires innées. Une activité dérégulée de **Ubd/FAT10** a été associée à des phénotypes liés à l’inflammation et à une protéostase altérée, ce qui en fait un point d’entrée pertinent pour étudier le remodelage tissulaire médié par l’immunité et les réseaux de signalisation impliqués dans les maladies dans des modèles murins.

FAT10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ubd sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAT10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ubd dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ubd, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAT10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ubd natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAT10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAT10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ubd silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.