Plasmide Double Nickase (h) FAT1: sc-410778-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FAT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FAT1 Double Nickase (h) et le plasmide FAT1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FAT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FAT1 Antibody (1634CT464.1.9): sc-517329
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FAT1 | sc-410778-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FAT1 | sc-410778-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAT1 code une cadhérine atypique qui agit comme un grand régulateur transmembranaire de l’adhésion cellulaire et de la polarité, coordonnant l’organisation du cytosquelette, des processus apparentés à la polarité planaire, ainsi que la signalisation dépendante du contact. FAT1 a été associée à la modulation de l’activité de la voie Hippo et à une interconnexion avec des programmes liés à Wnt/β-caténine, influençant la migration cellulaire, l’architecture tissulaire et la mécanotransduction. Une activité de FAT1 dérégulée ou des mutations ont été rapportées dans de nombreux types de tumeurs et sont également associées à des phénotypes du développement et rénaux, soulignant sa large pertinence pour l’étude de la morphogenèse et de l’intégrité épithéliale. Dans des cellules humaines en culture, la perturbation de FAT1 est couramment utilisée pour analyser la signalisation dépendante de l’adhésion, la dynamique d’invasion et le contrôle de la polarité.
FAT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.