Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAST (h): sc-406169
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- FAST Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique FAST, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FAST Antibody (B-9): sc-365125
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAST (h) | sc-406169 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
FASTK (Fas-activated serine/threonine kinase) code une protéine mitochondriale se liant à l’ARN, impliquée dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression des gènes mitochondriaux, notamment le traitement et la stabilité de certains ARN mitochondriaux nécessaires à la phosphorylation oxydative. Par ses rôles dans l’homéostasie mitochondriale, FASTK influence la bioénergétique cellulaire, l’adaptation au stress et la signalisation apoptotique liée aux voies médiées par Fas. Le dérèglement du métabolisme des ARN mitochondriaux et de la capacité OXPHOS associé à FASTK a été étudié dans des contextes de stress métabolique, de neurodégénérescence et de phénotypes de survie des cellules cancéreuses, où la fonction mitochondriale est un déterminant clé.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAST (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FASTK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FASTK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FASTK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAST.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FASTK pour l'étude de la signalisation de FAST, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de FASTK essentiels à la fonction de FAST
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FASTK pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le FAST plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAST plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FASTK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le FAST plasmide HDR (h) et le FAST (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FASTK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FASTK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.