FAST-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406686

Descripción general

FOXH1 codifica el factor de transcripción de la familia forkhead FAST-1, un mediador nuclear de la señalización de la superfamilia TGF-β que coopera con complejos SMAD2/3–SMAD4 para regular la transcripción sensible a NODAL/Activina. FAST-1 se une a motivos forkhead en los promotores diana e integra señales del desarrollo que controlan la especificación del mesendodermo, el establecimiento del eje izquierda–derecha y las transiciones epitelio–mesénquima mediante programas transcripcionales dependientes del contexto. La actividad desregulada de FOXH1 se ha vinculado a defectos congénitos de lateralidad y a alteraciones del desarrollo embrionario temprano, y una salida transcripcional TGF-β/SMAD modificada se asocia con frecuencia a procesos oncogénicos como la invasión y la metástasis. En modelos celulares, FOXH1 constituye un nodo manejable para diseccionar el uso de cofactores de SMAD, el reclutamiento a la cromatina y el “cross-talk” entre vías que afecta a la diferenciación y a la plasticidad de las células tumorales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FAST-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FOXH1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FOXH1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FOXH1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FAST-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FOXH1 para la investigación de la señalización de FAST-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FOXH1 críticos para la función de FAST-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FOXH1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FAST-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FAST-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FOXH1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FAST-1 (h) y el plásmido HDR FAST-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FOXH1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FOXH1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.