Plasmide CRISPR d'Activation (m) Fascin 2: sc-433603-ACT

Le gène murin **Fscn2** code la fascin-2, une protéine de faisceautage de l’actine qui organise des réseaux parallèles de F‑actine et soutient les protrusions membranaires, la forme cellulaire et la stabilité du cytosquelette. Les protéines de la famille des fascines contribuent au remodelage des filaments d’actine, en interaction avec la dynamique d’adhérence et les processus liés à la motilité, reliant ainsi l’architecture du cytosquelette à la mécanotransduction et à l’organisation cellulaire polarisée. Dans les contextes sensoriels et épithéliaux, la fascin-2 est associée à des structures spécialisées riches en actine, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du maintien du cytosquelette et de l’intégrité tissulaire. Un faisceautage de l’actine dérégulé et un remodelage médié par les fascines ont été impliqués dans des dysfonctionnements cellulaires dans divers modèles de maladies dégénératives et prolifératives, ce qui soutient l’exploration des voies dépendantes de **Fscn2** dans des systèmes murins.

Fascin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fscn2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fascin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fscn2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fscn2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fascin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fscn2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fascin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fascin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Fscn2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.