Plasmide Double Nickase (h) FAPα: sc-401511-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FAPα correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FAPα Double Nickase (h) et le plasmide FAPα Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FAP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FAPα Antibody (SS-13): sc-100528
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FAPα | sc-401511-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FAPα | sc-401511-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La protéine d’activation des fibroblastes alpha (FAPα) est une protéase à sérine transmembranaire de type II appartenant à la famille des dipeptidyl peptidases S9B, dotée à la fois d’activités dipeptidyl‑peptidase et endopeptidase. Elle est fortement exprimée par les fibroblastes activés et les populations stromales, et contribue au remodelage de la matrice extracellulaire par le clivage de substrats riches en proline, influençant les interactions cellule–matrice, l’adhésion et le comportement migratoire. L’activité de FAPα s’inscrit dans des programmes de signalisation stromale qui régulent le remodelage tissulaire et les microenvironnements inflammatoires, notamment des voies associées aux états d’activation des fibroblastes. Une expression altérée de FAP est fréquemment associée au remodelage fibrotique et au stroma associé aux tumeurs, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud fonctionnel pour étudier la régulation du microenvironnement dans des contextes pathologiques humains.
FAPα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.