Plásmido CRISPR de Activación (h) Fap-1: sc-401758-ACT

PTPN13 codifica la gran fosfatasa de tirosina proteica no receptora Fap-1 (también conocida como PTP-BAS), una proteína andamiaje con múltiples dominios PDZ que integra la actividad fosfatasa con interacciones proteína–proteína en la membrana plasmática y el citoesqueleto. Fap-1 modula las salidas de señalización al desfosforilar sustratos clave y organizar complejos asociados a receptores, influyendo en procesos como la regulación de la apoptosis, la adhesión celular y la migración. A través de interacciones con vías vinculadas a la señalización por receptores y la dinámica de las uniones celulares, PTPN13 ayuda a dar forma a las respuestas celulares ante señales de crecimiento y de estrés. La expresión alterada de PTPN13/Fap-1 o un desequilibrio en su señalización se ha asociado con una supervivencia desregulada y fenotipos invasivos descritos en diversos contextos patológicos, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del control de la señalización.

Fap-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPN13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fap-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPN13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPN13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fap-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPN13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fap-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fap-1 en células tumorales con expresión de PTPN13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.