Plasmide Double Nickase (h) FANCA: sc-403205-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FANCA correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FANCA Double Nickase (h) et le plasmide FANCA Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FANCA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FANCA | sc-403205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FANCA | sc-403205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FANCA code un composant essentiel de la voie de réparation de l’ADN de l’anémie de Fanconi (AF), qui protège l’intégrité du génome en situation de stress réplicatif en favorisant la réparation des pontages interbrins de l’ADN. FANCA participe au complexe central de l’AF, qui permet la monoubiquitination de FANCD2 et de FANCI, coordonnant ensuite le traitement nucléolytique, la recombinaison homologue et la protection des fourches de réplication. La perturbation de FANCA altère le contrôle des points de contrôle (checkpoints) et augmente les cassures chromosomiques ainsi que la formation de micronoyaux, en particulier après exposition à des agents induisant des pontages. Les variants pathogènes de FANCA constituent une cause majeure d’anémie de Fanconi et sont également pertinents pour l’étude de la biologie de l’insuffisance médullaire et des vulnérabilités de la réponse aux dommages de l’ADN dans des modèles de cancer.
FANCA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FANCA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FANCA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FANCA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FANCA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.