Plasmide CRISPR d'Activation (h) FAM98A: sc-411841-ACT

FAM98A code une protéine conservée de liaison à l’ARN, localisée principalement dans le cytoplasme et impliquée dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique. Elle a été associée à des complexes protéiques liés au traitement de l’ARN et à la traduction, contribuant à la protéostasie cellulaire et à des programmes associés à la croissance. Une expression altérée de FAM98A a été rapportée dans de nombreux types de tumeurs et est fréquemment étudiée dans le contexte de la prolifération, de l’adaptation au stress et de phénotypes associés aux métastases. Ces caractéristiques font de FAM98A une cible utile pour étudier comment le métabolisme de l’ARN s’articule avec la signalisation oncogénique et l’homéostasie cellulaire dans des systèmes modèles humains.

FAM98A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FAM98A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAM98A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FAM98A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FAM98A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAM98A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FAM98A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAM98A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAM98A dans les cellules tumorales présentant une expression de FAM98A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.