FAM73B Plasmide Double Nickase (h): sc-413719-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAM73B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAM73B Double Nickase Plasmid (h) e il FAM73B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MIGA2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAM73B Plasmide Double Nickase (h) | sc-413719-NIC | 20 µg | $410.00 |
MIGA2 (FAM73B) codifica una proteina della membrana esterna mitocondriale che contribuisce alla morfologia dei mitocondri promuovendo la fusione degli organelli e mantenendo l’integrità della rete mitocondriale. Attraverso il suo ruolo nella dinamica mitocondriale, FAM73B influenza il metabolismo energetico, l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno e il crosstalk tra mitocondri e reticolo endoplasmatico, che può incidere sulle risposte cellulari allo stress. Un’alterazione dell’equilibrio tra fusione e fissione mitocondriale è implicata nella disregolazione metabolica e in processi più ampi come l’apoptosi e la segnalazione dell’immunità innata. Un’attività alterata di FAM73B è stata studiata nel contesto di fenotipi associati a disfunzione mitocondriale, rilevanti per il metabolismo delle cellule tumorali e per la neurobiologia.
FAM73B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MIGA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MIGA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MIGA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MIGA2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.