Plasmide Double Nickase (h2) FAM35A: sc-416298-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) FAM35A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FAM35A Double Nickase (h2) et le plasmide FAM35A Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FAM35A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) FAM35A | sc-416298-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain FAM35A code une protéine nucléaire impliquée dans le maintien du génome, où elle module le choix des voies de réparation des cassures double brin de l’ADN et influence la résection des extrémités aux sites de dommages. Il a été associé au contrôle de la recombinaison homologue et à une interaction fonctionnelle avec des réseaux de réparation liés à BRCA1/BRCA2, affectant les réponses cellulaires au stress de réplication et aux agressions génotoxiques. Une activité ou une expression altérée de FAM35A est associée à des phénotypes d’instabilité génomique et a été observée dans des contextes pertinents pour la biologie du cancer et les états de déficit de réparation de l’ADN. Les réactifs FAM35A soutiennent des études mécanistiques de la signalisation des dommages à l’ADN, des criblages de perturbation basés sur CRISPR et l’analyse des dépendances aux voies de réparation, au moyen d’essais portant sur la formation de foyers de RAD51, des marqueurs de résection des extrémités et la dynamique des fourches de réplication.
FAM35A Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAM35A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAM35A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAM35A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAM35A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.