Partículas Lentivirales de Activación (m) FAM20C: sc-429814-LAC

Fam20c codifica FAM20C, una quinasa secretada localizada principalmente en el aparato de Golgi que fosforila motivos Ser-x-Glu/pSer en una amplia variedad de proteínas extracelulares y secretadas. Esta actividad quinasa favorece la maduración y la función de la vía secretora, incluida la fosforilación de proteínas de la matriz extracelular y de reguladores de la biomineralización, influyendo así en la osteogénesis, la formación de dentina y la homeostasis tisular. En modelos murinos, la alteración de la función de Fam20c se asocia con fenotipos esqueléticos y dentales y se ha utilizado para investigar redes de señalización que acoplan la composición de la matriz con la diferenciación celular. Dado que FAM20C modifica múltiples sustratos, perturbar su expresión ofrece un punto de entrada a nivel de sistemas para estudiar programas de fosforilación extracelular y vías de desarrollo impulsadas por la matriz.

Las partículas de activación lentiviral FAM20C (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Fam20c en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FAM20C (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Fam20c, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FAM20C. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Fam20c y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.