Particules Lentivirales d'Activation (m) FAM20A: sc-431579-LAC

Fam20a code pour FAM20A, une protéine de la voie de sécrétion qui agit comme une pseudokinase et comme partenaire régulateur de la kinase Golgi de la caséine FAM20C, favorisant la phosphorylation des protéines de la matrice extracellulaire et des protéines sécrétées. Dans les tissus murins, FAM20A contribue au traitement post-traductionnel et à la maturation des composants de la matrice minéralisée, reliant le trafic Golgi/sécrétoire à la signalisation extracellulaire et à l’organisation de la matrice. La perturbation de la phosphorylation dépendante du complexe FAM20A–FAM20C peut altérer la biomineralisation et les interactions épithélio-mésenchymateuses, ce qui fait de Fam20a un gène pertinent pour l’étude de la formation de l’émail, de l’homéostasie minérale des tissus et de la biologie de la voie sécrétoire. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de Fam20a sont donc utilisées pour explorer la régulation du phosphoprotéome extracellulaire et les phénotypes de développement induits par la matrice.

Les particules d'activation lentivirales FAM20A (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Fam20a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FAM20A (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Fam20a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FAM20A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Fam20a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.