Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM123A (h): sc-404231

Présentation

AMER2 (FAM123A) est une protéine cytoplasmique impliquée dans la régulation de la signalisation Wnt/β-caténine et des processus associés à la polarité cellulaire, reliant des signaux proximaux à la membrane à des programmes transcriptionnels en aval qui influencent la prolifération et la différenciation. En modulant des composants du réseau de régulation de la β-caténine, FAM123A peut affecter l’adhérence et l’organisation du cytosquelette, avec un impact potentiel sur l’architecture des tissus épithéliaux. Une activité altérée de la voie Wnt est largement pertinente en biologie du développement et dans la transformation oncogénique, faisant d’AMER2 un point d’entrée utile pour disséquer les dépendances à l’état de signalisation. Les recherches sur AMER2/FAM123A soutiennent des études mécanistiques des interactions entre voies (crosstalk), des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte et des relations génotype–phénotype dans des modèles de cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM123A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AMER2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AMER2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AMER2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM123A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AMER2 pour l'étude de la signalisation de FAM123A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AMER2 essentiels à la fonction de FAM123A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AMER2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM123A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAM123A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AMER2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM123A plasmide HDR (h) et le FAM123A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AMER2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AMER2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.