Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM122A (m): sc-426886

Présentation

Fam122a code pour FAM122A, une protéine régulatrice conservée impliquée dans le contrôle de l’activité des phosphatases sérine/thréonine, notamment via la modulation des complexes PP2A. En influençant la déphosphorylation dépendante de PP2A, FAM122A peut affecter des programmes de signalisation gouvernés par la phosphorylation, liés à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et, plus largement, aux réseaux de protéostasie. La perturbation de la régulation de PP2A est largement associée à des altérations du contrôle de la croissance et de la signalisation du stress, ce qui fait de Fam122a une cible utile pour des études mécanistiques des voies centrées sur les phosphatases. Dans les systèmes murins, la perturbation de Fam122a permet d’examiner comment l’homéostasie de la phosphorylation façonne des phénotypes cellulaires pertinents pour une dérégulation de la signalisation associée aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM122A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fam122a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fam122a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fam122a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM122A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fam122a pour l'étude de la signalisation de FAM122A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fam122a essentiels à la fonction de FAM122A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fam122a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM122A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FAM122A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fam122a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM122A plasmide HDR (m) et le FAM122A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fam122a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fam122a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.