Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM118A (h): sc-412412

Présentation

FAM118A code une protéine nucléaire conservée impliquée dans des fonctions fondamentales du métabolisme de l’ARN, notamment le traitement de l’ARN et le fonctionnement des complexes ribonucléoprotéiques, ce qui est compatible avec un rôle dans le maintien de l’homéostasie de l’expression génique. Des études fonctionnelles récentes suggèrent que FAM118A contribue à la régulation des programmes de croissance et de survie cellulaires, l’associant à des voies qui soutiennent la capacité proliférative et l’adaptation au stress. Une expression altérée de FAM118A a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, en particulier dans les cancers, où elle pourrait être associée à un remodelage transcriptionnel et post-transcriptionnel. Ainsi, FAM118A présente un intérêt pour comprendre comment les réseaux de régulation de l’ARN influencent des phénotypes cellulaires pertinents pour la transformation et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM118A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FAM118A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FAM118A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FAM118A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM118A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FAM118A pour l'étude de la signalisation de FAM118A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FAM118A essentiels à la fonction de FAM118A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FAM118A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM118A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAM118A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FAM118A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM118A plasmide HDR (h) et le FAM118A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FAM118A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FAM118A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.