Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAIM (m): sc-423872

Présentation

Faim code pour la « Fas apoptotic inhibitory molecule » (FAIM), un facteur cytoprotecteur qui atténue l’apoptose déclenchée par les récepteurs de mort et module les voies de signalisation de survie cellulaire en réponse aux signaux de la famille Fas/TNFR. Dans les cellules de souris, FAIM a été associée à la régulation de l’activation des caspases, des réponses au stress et de voies de survie telles que NF-κB et PI3K/AKT, influençant l’issue des processus lors de l’activation immunitaire et du maintien de l’homéostasie tissulaire. Une activité altérée de FAIM a été liée à une survie lymphocytaire dérégulée, à une sensibilité accrue au stress neurodégénératif et à des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du contrôle de l’apoptose et des décisions de destinée cellulaire. L’analyse fonctionnelle de Faim étaye des travaux mécanistiques en immunologie, en neurobiologie et sur les voies gouvernant la résistance aux stimuli apoptotiques extrinsèques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAIM (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Faim dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Faim, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Faim à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAIM.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Faim pour l'étude de la signalisation de FAIM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Faim essentiels à la fonction de FAIM
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Faim pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAIM plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FAIM plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Faim. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAIM plasmide HDR (m) et le FAIM (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Faim pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Faim définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.